小鼠外周血血小板分離液試劑盒

規格：200 mL/kit

保存：本產品對光敏感，應該室溫避光儲存，保質期 2 年。無菌開封后，保存于室溫。

1. 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。

2. 在離心管中加入至少5mL的分離液（當血液的體積大于等于3mL，加入2倍體積分離液，但二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則會影響分離效果）。

3. 將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因為兩者的密度差異，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多，加樣的時間較長，在離心之前出現紅細胞成團下沉屬正?，F象）。

4. 室溫，水平轉子200-250g ，離心15min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時間越長，最佳的分離條件需摸索）。

5. 離心后，此時離心管中由上至下分為四層：最上層為富含血小板的血漿層；第三層為分離液層；分離液與血漿層之間是白色細胞層；第四層為紅細胞層。

6. 小心的吸取富含血小板的血漿層到15mL潔凈的離心管中，加入10mLPBS或細胞洗滌液（如果需要得到富含血小板的血漿， 可直接吸取，不再清洗）。500g，離心20min。

7. 棄上清，5mL的PBS或細胞洗滌液重懸血小板，500g，離心

20min。

8. 棄上清，重懸備用。

注意事項：

A. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免微生物污染。。

B. 分離液使用時應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內溫度較低，可將分離液預熱。4℃或者是溫度較低的條件下離心，分離效果差。

C. 吸取過多的血小板血漿層下層溶液會導致交界處白細胞混雜。

D. 血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血2 h以內），避免冷凍和冷藏。

 分離示意圖

富含血小板的血漿層細胞層

分離液層

紅細胞層

E. 稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養液，降低細胞得率及純度。

F. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導致細胞掛壁，影響分離效果。

G. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以對血液稀釋或者是調節離心轉數和離心時間， 摸索最佳的分離條件。

H. 不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。

參考文獻：

1. Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J Clin Lab Invest Suppl. 1968; 97: 7.

2. Ting A, Morris PJ. A technique for lymphocyte preparation from stored heparinized blood. Vox Sang. 1971 Jun; 20(6): 561-3.

3. Boyum A. Separation of Blood Leucocytes, Granulocytes and Lymphocytes Tissue Antigens. 1974; 4(4): 269-74.

4. Weisbart RH, Webb WF, Bluestone R, Goldberg LS. A simplified method for lymphocyte separation. Vox Sang. 1972; 23(5): 478-80.

5. Recalde HR. A simple method of obtaining monocytes in suspension. J Immunol Methods. 1984 Apr 13;69(1):71-7.

6. B?yumA ,L?vhaugD ,TreslandL.Separation of leucocytes: improved cell purity by fine adjustments of gradient mediu m density and osmolality. Scand J Immunol. 1991 Dec; 34(6):697-712.

7. Harris R, Ukaejiofo EO. Tissue typing using a routine one-step lymphocyte separation procedure. Br J Haematol. 1970 Feb; 18(2):229-35.