細胞名稱：EC-304細胞，人血管內皮細胞ATCC

細胞代次：P4

細胞規格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運輸費）

細胞凍存：無血清凍存液

細胞傳代：第一次建議1:2

細胞收到后處理

培養至良好狀態后灌滿培養液并封好瓶口是運輸細胞的最好辦法。收到細胞用75%酒精噴灑整個細胞瓶，消毒后放到超凈臺內嚴格無菌操作，將細胞瓶放入37℃、5%CO₂的培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態后再做處理。顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據，不提供照片默認收到狀態良好。（注意密封培養瓶放入培養箱時要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養基，另外一瓶用自己配的培養基，以便進行對比培養）

培養步驟

細胞傳代：如果未超過80%匯合度時，將瓶裝的培養液收集至離心管中，留5ml培養基，放入37℃、5%CO₂孵箱培養；如果細胞密度超80%，即可進行傳代培養，傳代具體步驟如下細胞傳代：

A1、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

A2、懸浮細胞凍存：

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，將T25 培養瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm

離心5min；

2、棄上清，沉淀細胞加入1ml/支的雅吉生物無血清凍存液（C7001），混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液即可）

3、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉入液氮罐中，需在-80℃冰箱存

放 24 小時以上。

B1、對于貼壁細胞，傳代可參考如下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，使之脫落后吸出，然后將懸液轉移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基重懸。

4. 將細胞懸液按1：2的比例進行分瓶傳代（兩個T25瓶），補充新的培養基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO₂的細胞培養箱中培養。

B2、貼壁細胞凍存：

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄T25培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2、添加0.25%消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入5ml培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；

3、 棄上清，沉淀細胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中。

細胞復蘇：

1、從液氮中取出細胞凍存管（注意佩戴防護面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 培養基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、棄上清，沉淀用5ml培養基重懸，接種至T25培養瓶，放于37℃,5%CO₂細胞培養箱中培養；

4、第二天，換用新鮮培養基繼續培養。

注意事項：有些細胞比較特殊，如貼壁不牢，在運輸過程中發生容易細胞脫落，這是正常現象。請將培養瓶所有培養液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過渡培養（后期對比培養），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養基終止反應。再離心，棄上清，加1-2ml培養基重懸。然后按1:2比例進行分瓶傳代（兩個T25），補充新的培養基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細胞培養箱中培養。MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒：MTT比色法是一種檢測細胞存活和生長的方法，MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測，MTT檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色Formazan并沉積在細胞中，而死細胞無此功能，在特定溶劑存在的情況下可以被溶解，然后通過酶標儀可以測定570nm波長附近的吸光度，細胞增殖越多越快，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。該產品檢測本底低，靈敏度高，線性范圍寬。該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

YS101CDU-145人前列腺癌細胞

YS102CHUVEC和A549融合株EA.hy926

YS103CEAC小鼠艾氏腹水癌細胞

YS104CEC-304人血管內皮細胞

YS105CEC9706人食管癌細胞

YS106CEca-109人食管癌細胞

YS107CEJ人膀胱癌細胞

YS108CEL4小鼠淋巴瘤細胞

YS109C小鼠乳腺癌EMT-6

YS110CES-2癌細胞人卵巢透明細胞

YS111CFaDu人咽鱗癌細胞

YS112CGBC-SD人膽囊癌細胞

YS113CGES-1人胃粘膜細胞

YS114C肺腺癌GLC-82

YS115CNCI-H1299人肺腺癌細胞

YS116CH22小鼠肝癌細胞

YS117CH9c2(2-1)大鼠心肌細胞

YS118CHaCaT人正常皮膚細胞

YS119CHAL-01人急性混合型白血病細胞

YS120CHBZY-1大鼠腎內膜細胞

YS121CHCC1937人乳腺癌細胞

YS122CHCC827肺癌細胞人非小細胞

YS123C肝癌HCC-9204

YS124CHCCLM3人高轉移肝癌細胞

YS125C低分化結腸腺癌HCT-116

YS126CHCT-15人結腸癌細胞

YS127CHCT-8人結腸癌細胞

YS128CHEC-1-A人子宮內膜腺癌細胞

YS129CHEC-1-B人子宮內膜腺癌細胞

YS130CHEL白血病細胞人紅白細胞

YS131CHeLa人宮頸癌細胞

YS132C宮頸癌HelaS3

YS133CHELF人胚肺成纖維細胞

YS134CHep3B2.1-7人肝癌細胞

YS136C肝癌Hep3B

YS137CHepG2人肝癌細胞

YS138CHES人胚皮膚成纖維樣細胞

YS139C(未分化)HGC-27人胃癌細胞

YS140CHK-2人腎近曲小管上皮細胞

YS141CHL-60人白血病細胞

YS142CHO-8910人卵巢癌細胞

YS143CHO-8910PM人高轉移卵巢癌細胞

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