鐵是人體必需微量元素，總含量約為3270mg，鐵分布較廣，有67.6%的鐵作為血紅蛋白分子的輔基分布于血紅蛋白中，

參與鐵的運(yùn)輸；骨骼和肌紅蛋白中各存在2.59%和4.15%，儲(chǔ)存鐵約占25.37%血清中鐵均以三價(jià)鐵離子形式與轉(zhuǎn)鐵蛋白

結(jié)合，因此測定血清鐵時(shí)，首先需要Fe3+與轉(zhuǎn)鐵蛋白分離；總鐵結(jié)合力(TIBC)是指血清中轉(zhuǎn)鐵蛋白能與鐵結(jié)合的總量。

鐵試劑盒(亞鐵嗪比色法)是采用分光光度法以亞鐵嗪為底物進(jìn)行總鐵結(jié)合力的檢測，

是將過量的鐵加入待測血清、血漿中，使鐵與多余的轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合，游離鐵被鐵吸附劑吸附除去，在酸性介質(zhì)中與轉(zhuǎn)鐵蛋白

結(jié)合的血清鐵從轉(zhuǎn)鐵蛋白中解離出來，再被還原劑還原為Fe2+，后者與亞鐵嗪生成紫紅色化合物，通過酶標(biāo)儀檢測562nm

處吸光度值，適用于檢測血清、血漿樣品中的總鐵含量，即為總鐵結(jié)合力(TIBC)；上述檢測方法屬于直接檢測法，

應(yīng)設(shè)血清空白，糾正血清本身的色度，根據(jù)公式計(jì)算出鐵含量，該檢測試劑盒在140μmol/L以下線性關(guān)系良好，

甘油三脂≤3.39mmol/L，≤171μmol/L，對(duì)本法基本無干擾。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動(dòng)秒表計(jì)時(shí)，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動(dòng)情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時(shí)間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時(shí)間的平均值作為ACT 值。

計(jì)算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標(biāo)準(zhǔn)品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml，如果檢測組織樣品按丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_(dá)到60μg/ml。

注意事項(xiàng):

1、實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2、實(shí)驗(yàn)用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請(qǐng)小心操作。

4、TA標(biāo)定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請(qǐng)棄用。

5、果實(shí)中含酸量較少時(shí)可將TA滴定液適當(dāng)稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進(jìn)行滴定。

6、TA滴定液含量計(jì)算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值。

7、如果所測樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點(diǎn)不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法。

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