堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動物組織內(nèi)，其活性所需最適pH 9.2~9

.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細胞膜)，如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及

微動脈和毛細血管動脈部之內(nèi)皮，還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及

平滑肌的細胞膜。

同工酶檢測試劑盒(熱穩(wěn)定性法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP比色法，其檢測原理是

Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)為一種常用的磷酸酶顯色底物，在酸性條件下，可在堿性磷酸酶的作用下生成

p-nitrophenol；在堿性條件下p-nitrophenol轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈較深的黃色，產(chǎn)物黃色越深說明堿性磷酸酶活性越高，

反之則酶活性越低，通過比色法(酶標儀)測定400～415nm處吸光度，據(jù)此通過比色分析就可以計算出堿性磷酸酶活性水平

，可用于檢測細胞或組織的裂解液或勻漿液、血漿、血清、尿液等樣品中內(nèi)源性的堿性磷酸酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域

，不適用于臨床診斷或其他用途。

計算：堿性磷酸酶金氏活性單位的定義：在 37℃條件下，100ml 待測樣品與顯色底物(即 ALP

顯色液所含物質(zhì))作用 15min，產(chǎn)生 1mg 酚為一個金氏單位。

以系列 Phenol 標準(1～6 號)對應(yīng)的金氏單位(5、10、20、30、40、50U/L)為橫坐標，以相應(yīng)

的 A 標準(1～6 號)為縱坐標，繪制標準曲線。以 A 測定-A 對照的差值為實際的吸光度，用

該差值與標準曲線進行對比，求出酶活力單位。

參考區(qū)間(37℃)：

健康成年人 3～13 金氏單位

健康兒童 5～28 金氏單位

注意事項：

1、待測樣品中不能含有磷酸酶抑制劑，同時需避免反復凍融。

2、如果沒有酶標儀，也可以使用分光光度計測定，但應(yīng)注意 96 孔板最大檢測體積。

3、所測樣品的值高于標準曲線的上限，應(yīng)稀釋樣品后重新測定。

4、空白孔如果顯紅色，說明 ALP 顯色液不可用，應(yīng)丟棄。

5、加入顯色基液時應(yīng)迅速，并且及時混勻，否則顯色不充分。

6、如無法檢測 510nm，亦可檢測 500～530nm 范圍內(nèi)吸光度。

7、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

附錄：參考標準曲線范圍：測定 Phenol 標準在 5~50U/L 金氏單位時，通過酶標儀 505nm 測

定其吸光度多在 0.1~1.0 之間，標準曲線參考如下：

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