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(T-GSH)檢測試劑盒(DTNB速率微板法)

簡要描述:(T-GSH)檢測試劑盒(DTNB速率微板法),雅吉生物是一家生物企業主營ATCC細胞,細胞系,原代細胞和培養試劑,重組蛋白,ELISA試劑盒、抗體、熒光定量PCR檢測試劑盒

  • 產品型號:TO1048
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2024-11-01
  • 訪  問  量:383

詳細介紹

動物或植物細胞發生氧化應激(oxidative stress)時,會發生脂質氧化。丙二醛(Malondialdehyde, MDA)是一種生物體脂質氧化

的天然產物,一些脂肪酸氧化后逐漸分解為一系列包括MDA在內的復雜化合物,此時通過檢測MDA的水平即可檢測脂質氧化的

水平,因此MDA的測定被廣泛用作脂質氧化的指標。生物體內的一些其它生化反應也會產生MDA,

例如thromboxane synthase也可以催化產生,但只要在測定時設置適當對照即可觀察到脂質氧化水平的變化。


(T-GSH)檢測試劑盒(DTNB速率微板法)(Plant MDA Assay Kit with TBA)又稱脂質氧化(MDA)檢測試劑盒,

是采用一種基于MDA和硫酸(thiobarbituric acid, TBA)反應產生紅色產物的顯色反應,隨后通過比色法用于對植物組織

(根、莖、葉、種子等)MDA進行檢測,是專門用于植物脂質氧化(lipid peroxidation)水平檢測的試劑盒,不適用于動物組織

、細胞、血液等;丙二醛在較高溫度及酸性環境中可與TBA發生反應,形成紅色的MDA-TBA加合物,MDA-TBA加合物在532nm處有最大吸收,該復合物的吸光系數為155mmol/(L.cm),并且在600nm波長處有最小吸收,植物組織中糖類物質對

MDA-TBA反應有干擾,我們總結出經驗公式,以消除這一干擾,亦可以通過比標準品進行比較,進行含量檢測。

該試劑盒僅用于科研領域,不適用于臨床診斷或其他用途。


操作步驟(僅供參考)

自備材料:

1、蒸餾水

2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管

3、低溫離心機、恒溫箱或水浴鍋、酶標儀、酶標板


操作步驟(僅供參考):

1、準備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉,加入2.5ml PAL Lysis Buffer,冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿,4℃ 10000r/min

離心15~20min,留取上清液,-20℃凍存,用于苯丙氨解氨酶的檢測。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定,-20℃凍存,用于苯丙解氨的檢測。

③細胞或組織樣品∶取恰當細胞或組織裂解液,如果有必要需進行適當勻漿,4℃ 10000r/min離心15~20min,取上清液,

-20℃凍存,用于苯丙酸解氨酶的檢測。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶,可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進行恰當的稀釋。

2、PAL加樣∶

取96孔板,按照下表設置對照孔、測定孔,溶液應按照順序依次加入,并

注意避免產生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高,可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定,樣品的檢測最好能設置2平行孔,

求平均值。

加入物(μl)對照孔測定孔

蒸餾水150100

待測樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL檢測︰

以對照孔為對照(調零),酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為   A測定0);40℃準確孵育1h,立即加入10μl PAL終止

液終止反應(備選方案),以對照孔為對照調零,酶標儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為A測定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應為非必須步驟,可37℃準確孵育1h后直接以對照孔為對照調零,酶標儀立即測定290nm處測定

孔的吸光度。

注意事項∶

1、待測樣品中不能含有酶抑制劑,同時需避免反復凍融。

2、獲得上清液為PAL酶液,應盡快檢測,亦可-20°℃保存。

3、如果沒有可測定紫外區的酶標儀和酶標板,也可以使用紫外分光光度計和石英比色皿,但應注意比色杯的最小檢測體積。

4、每次檢測指標不宜過多,否則操作時間不一,有可能導致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。




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