Virus DNA/RNA cDNA Synthesis Kit試劑病毒cDNA第一鏈反轉(zhuǎn)錄試劑盒采用穩(wěn)定高效的反轉(zhuǎn)錄預(yù)混體系5×Golden RT MasterMix進(jìn)行RNA的反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，

使用時(shí)只需加入模板、引物和RNase Free H2O 即可，大大簡(jiǎn)化了操作過(guò)程、提高了效率、減少了操作過(guò)程中的人為誤差；

該試劑盒適用于病毒RNA 樣品的cDNA合成。

該預(yù)混體系包含點(diǎn)突變致RNase H活性缺失的Golden MLV Reverse Transcriptase反轉(zhuǎn)錄酶、dNTP、反應(yīng)Buffer、

gDNA去除試劑和RNase Inhibitor。該試劑盒采用的反轉(zhuǎn)錄酶去除了RNase H活性，從而避免反轉(zhuǎn)錄過(guò)程中降解RNA。

同時(shí)經(jīng)過(guò)突變文庫(kù)篩選，使得其熱穩(wěn)定性更強(qiáng)，可耐受55℃高溫反應(yīng)。相比于低溫條件下反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，

采用高溫反轉(zhuǎn)錄可顯著打開(kāi)RNA二級(jí)結(jié)構(gòu)，從而提高復(fù)雜RNA模板的擴(kuò)增性能、提高反轉(zhuǎn)錄cDNA的長(zhǎng)度和產(chǎn)量，

從而提高后續(xù)檢測(cè)的靈敏度。合成的第一鏈cDNA可廣泛用于2nd Strand的合成、雜交、PCR擴(kuò)增、Real-Time PCR反應(yīng)等。

組分

組分名稱100T2000T

5XGolden RT MasterMix400 μl1 ml×8

20XRandom Primer100 μl1 ml×2

Rnase Free H2O1 ml×250 ml

主要特征

55℃進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄的MLV反轉(zhuǎn)錄酶，能更好的轉(zhuǎn)錄含有復(fù)雜高級(jí)結(jié)構(gòu)的RNA模板

高效便捷的反轉(zhuǎn)錄預(yù)混體系

儲(chǔ)存

請(qǐng)置于-20°C，可保存2年；避免反復(fù)凍融。注：如5×Golden RT MasterMix(with gDNA Remover)出現(xiàn)沉淀屬正常現(xiàn)象，可用手捂化，混合均勻后使用不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

Virus DNA/RNA cDNA Synthesis Kit試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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